Elektroforeza: šta je to, čemu služi i kako se to radi

Sadržaj

• Čemu služi
• Kako se to radi
• Vrste elektroforeze
• 1. Elektroforeza hemoglobina
• 2. Elektroforeza proteina

Elektroforeza je laboratorijska tehnika koja se izvodi s ciljem razdvajanja molekula prema njihovoj veličini i električnom naboju, tako da se može postaviti dijagnoza bolesti, provjeriti ekspresija proteina ili identificirati mikroorganizmi.

Elektroforeza je jednostavan i jeftin postupak koji se koristi u laboratorijskim rutinama i u istraživačkim projektima. U skladu sa svrhom elektroforeze, možda će biti potrebno provesti druge testove i preglede kako bi se, na primjer, došlo do dijagnoze.

Čemu služi

Elektroforeza se može izvoditi u više svrha, kako u istraživačkim projektima, tako i u dijagnostici, jer je to jednostavna i jeftina tehnika.Dakle, elektroforeza se može izvesti na:

• Identificirajte viruse, gljivice, bakterije i parazite, s tim da je ova aplikacija češća u istraživačkim projektima;
• Test očinstva;
• Provjeriti ekspresiju proteina;
• Identificirati mutacije, na primjer korisne u dijagnozi leukemije;
• Analizirajte vrste hemoglobina u cirkulaciji, koji su korisni u dijagnozi anemije srpastih ćelija;
• Procijenite količinu proteina prisutnih u krvi.

U skladu sa svrhom elektroforeze, možda će biti potrebno provesti druge komplementarne testove da bi liječnik dovršio dijagnozu.

Kako se to radi

Za elektroforezu potreban je gel, koji može biti od poliakrilamida ili agaroze, ovisno o cilju, pufer za elektroforezu i bačvu, marker molekularne težine i fluorescentna boja, pored UV ili LED svjetlosne opreme, poznate i kao transilluminator .

Nakon pripreme gela, mora se postaviti određeni predmet kako bi se napravile jažice u gelu, popularno zvanom češalj, i pustile da gel stegne. Kada je gel spreman, samo nanesite supstance na jažice. Zbog toga se u jednu jažicu mora staviti marker molekularne težine, pozitivna kontrola, odnosno supstanca koja je poznata, negativna kontrola koja garantira valjanost reakcije i uzorci koji se analiziraju. Svi uzorci moraju biti pomiješani sa fluorescentnom bojom, jer je na taj način moguće vizualizirati trake na transilluminatoru.

Gel s uzorcima mora se staviti u posudu za elektroforezu koja sadrži određenu pufersku otopinu, a zatim se uređaj uključi tako da postoji električna struja i, shodno tome, razlika potencijala, što je važno za odvajanje čestica prema prema njihovom opterećenju i veličini. Vrijeme elektroforetskog rada varira ovisno o svrsi postupka i može trajati do 1 sata.

Nakon određenog vremena moguće je vidjeti rezultat elektroforetskog prolaska kroz transilluminator. Kada se gel stavi pod UV ili LED svjetlost, moguće je vidjeti uzorak traka: što je veća molekula, to manje migrira, približavajući se jamici, dok je molekula lakša, veći je migracijski potencijal.

Da bi se reakcija potvrdila, potrebno je vizualizirati vrpce pozitivne kontrole i u negativnoj kontroli ništa, jer je u suprotnom pokazatelj da je došlo do kontaminacije i cijeli postupak se mora ponoviti.

Vrste elektroforeze

Elektroforeza se može izvoditi u različite svrhe, a prema njenoj namjeni može se koristiti nekoliko vrsta gela, a najčešći su poliakrilamid i agaroza.

Elektroforeza za identifikaciju mikroorganizama češće se izvodi u istraživačkim laboratorijama, međutim, u dijagnostičke svrhe elektroforeza se može koristiti za identifikaciju hematoloških bolesti i bolesti koje evoluiraju s povećanjem količine proteina, a to su glavne vrste elektroforeze:

1. Elektroforeza hemoglobina

Elektroforeza hemoglobina je laboratorijska tehnika koja se izvodi za identifikaciju različitih vrsta hemoglobina koji cirkulišu u krvi, što omogućava utvrđivanje prisustva bolesti povezanih sa sintezom hemoglobina. Tip hemoglobina identificira se elektroforezom pri određenom pH, idealno između 8,0 i 9,0, s verifikovanim uzorkom traka koji se može uporediti sa normalnim uzorkom, što omogućava identifikaciju prisustva abnormalnih hemoglobina.

Za šta je napravljen: Elektroforeza hemoglobina vrši se za istraživanje i dijagnosticiranje bolesti povezanih sa sintezom hemoglobina, kao što su anemija srpastih ćelija i bolest hemoglobina C, pored toga što je korisna u razlikovanju talasemije. Naučite kako tumačiti elektroforezu hemoglobina.

2. Elektroforeza proteina

Elektroforeza proteina je ispit koji liječnik zahtijeva da bi procijenio količinu proteina koji cirkuliraju u krvi i, na taj način, prepoznao bolesti. Ovaj test se radi na uzorku krvi, koji se centrifugira kako bi se dobila plazma, koji dio krvi, između ostalog, sadrži i proteine.

Nakon elektroforeze može se vizualizirati uzorak traka, a nakon toga i grafikon u kojem je naznačena količina svake frakcije proteina, što je osnovno za dijagnozu.

Za šta je napravljen: Elektroforeza proteina omogućava liječniku da istraži pojavu multiplog mijeloma, dehidracije, ciroze, upale, bolesti jetre, pankreatitisa, lupusa i hipertenzije prema uzorku traka i grafikonu predstavljenom u izvještaju o pregledu.

Razumjeti kako se to radi i kako razumjeti rezultat proteinske elektroforeze.