Mrlja po Gramu: kako se pravi i za šta služi

Sadržaj

• Kako se vrši mrlja po Gramu
• Čemu služi

Gramova mrlja, ili jednostavno Gram, brza je i jednostavna tehnika koja ima za cilj razlikovanje bakterija prema karakteristikama njihovog ćelijskog zida nakon izlaganja različitim bojama i rastvorima.

Dakle, pomoću bojenja po Gramu moguće je, pored oblika bakterija, provjeriti i boju koju one dobiju, a ovaj rezultat je važan za definiranje drugih strategija za identifikaciju bakterijskih vrsta i za liječnika koji ukazuje na preventivni tretman prema mikroskopski posmatranim karakteristikama.

Bojenje grama obično se radi rutinski u laboratoriji i dio je pregleda za bakterioskopiju. Shvatite šta je bakterioskopija i kako se to radi.

Kako se vrši mrlja po Gramu

Mrlja po Gramu je brza, praktična i jeftina metoda za identificiranje bakterija odgovornih za infekcije, a korisna je za liječnike da ukažu na preventivni tretman infekcije koja se može dogoditi, jer su poznate specifične karakteristike ovih grupa bakterija,

Bojenje po Gramu vrši se u 7 glavnih koraka, međutim protokol može varirati ovisno o laboratoriju:

1. Stavite nekoliko kolonija bakterije na tobogan, dodajući kap vode kako biste olakšali homogenizaciju kolonija;
2. Pustite da se malo osuši i oštrica može brzo proći kroz plamen kako bi pogodovala sušenju, međutim važno je obratiti pažnju na temperaturu, jer ako je temperatura previsoka moguće je da dođe do promjene u strukturi bakterije, koje mogu ometati rezultat pregleda;
3. Kad se dijapozitiv osuši, prekrijte bojom kristalno ljubičaste boje i pustite da djeluje oko 1 minute;
4. Oprati stakalce mlazom tekuce vode i prekriti tobogan lugolom koji ima za cilj fiksiranje plave boje i pustiti da djeluje 1 minutu. Obje vrste bakterija mogu apsorbirati kompleks koji čine boja i lugol, postajući plavi;
5. Zatim operite tobogan tekućom vodom i nanesite 95% alkohola, ostavljajući da djeluje 30 sekundi. Alkohol je odgovoran za otapanje lipidne membrane koja stvara gram negativne bakterije i, na taj način, uklanjanje kompleksa nastalog između boje i lugola, obezbojenje ovih bakterija. Međutim, u slučaju gram-pozitivnih bakterija, alkohol dehidrira stanični zid gram-pozitivnih bakterija, uzrokujući da se pore skupljaju i čine ih nepropusnim;
6. Zatim ga treba ponovo oprati pod mlazom vode i pokriti predmetno staklo drugom bojom, fuksinom ili safraninom i pustiti da djeluje 30 sekundi;
7. Zatim operite tobogan pod tekućom vodom i ostavite da se osuši na sobnoj temperaturi.

Jednom kada se stakalce osuši, moguće je staviti kap uranjajućeg ulja i promatrati predmetno staklo pod mikroskopom sa objektivom od 100x, a moguće je provjeriti prisustvo ili odsustvo bakterija, kao i prisustvo kvasca i epitelnih stanica.

Čemu služi

Glavni cilj bojanja po Gramu je razlikovanje bakterija prema karakteristikama staničnog zida i općoj morfologiji. Prema tome, prema karakteristikama uočenim pod mikroskopom, bakterije se mogu klasificirati na:

• Gram-pozitivne bakterije, koji se vizualiziraju plavom bojom zbog činjenice da ih alkohol ne mijenja, jer imaju deblji stanični zid i pore im se sužavaju kada su izloženi lugolu;
• Gram negativne bakterije, koji se vizualiziraju ružičastom / ljubičastom bojom zbog činjenice da su obojeni alkoholom i obojeni safraninom ili fuksinom.

Nakon vizualizacije bakterija pod mikroskopom, moguće je da će se u laboratoriju provesti i druga ispitivanja kako bi se identificirale vrste bakterija. Međutim, putem Grama i povezanosti sa znakovima i simptomima koje osoba predstavlja, liječnik može ukazati na preventivni tretman dok ne postanu dostupni rezultati konkretnijih pregleda, jer je na taj način moguće smanjiti stopu replikacije bakterija i spriječiti komplikacije.